- Идентификация маркеров наркотика в биологических образцах
- Возможно, ли получить недостоверные результаты
- Заключение
Методы детектирования наркотиков в биологических образцах постоянно совершенствуются. Этому способствует синтез новых психоактивных веществ в подпольных лабораториях. Иммунохимические методы позволяют в течение нескольких минут установить факт метамфетаминовой наркомании. Но для подтверждения результатов биожидкость направляется в химико – токсикологическую лабораторию.
Идентификация маркеров наркотика в биологических образцах
Независимо от способа употребления метамфетамин попадает в кровоток. С током крови наркотик попадает в каждую клетку организма. Но при этом от способа употребления зависит скорость достижения фармакологического эффекта и концентрация ядовитых веществ в биологических образцах.
После проникновения в организм токсинов запускается механизм самоочищения. Процесс естественной детоксикации помогает обезвредить опасные вещества. Далее через мочевыделительную систему происходит экскреция продуктов распада. Но метамфетамин защищен дополнительной метильной группой, которая препятствует быстрому распаду.
При хронической наркомании метамфетамин аккумулируется в тканях и время для идентификации маркеров наркотика значительно увеличивается. Биотрансформация психоактивного вещества происходит в несколько этапов.
Факторы, влияющие на скорость распада:
- Принятая доза и систематичность употребления;
- Наркоманический стаж;
- Заболевания печени и почек;
- Избыточный вес;
- Скорость метаболизма;
- Питьевой режим и питание;
- Физическая активность.
Остаточные продукты распада связываются с кислотами. Это свойство помогает обнаружить токсиканты в различных биологических образцах.
Метамфетамин связывается с белками плазмы, поэтому концентрация метаболитов будет низкой. Для наркодиагностики чаще используют образец мочи. Поскольку в ней на протяжении недели даже после однократного употребления наркотика сохраняется достаточная концентрация для идентификации маркеров.
Способов для установления факта амфетаминовой наркомании много. Но между ними существуют различия.
Методы исследований:
- Предварительные – иммунохимический анализ:
- Поляризационный флюорисцентный;
- Иммуноферментный;
- Цветной тест;
- Иммунохроматографический.
- Подтверждающие – инструментальный анализ:
- Газовая хроматография;
- Жидкостная хроматография;
- Масс – спектрометрия.
В основу иммунохимического анализа положена реакция взаимодействия антигена со специфичными к нему антителами, свойства которых в основном и определяют селективность и чувствительность метода. Однако антитела не образуют низкомолекулярные соединения, которые получили название «гаптены» или «неполноценные антигены». Для получения иммунного ответа к ним необходимо прикрепить белок-носитель с большой молекулярной массой. Все наркотические и психотропные вещества являются гаптенами, поэтому необходим этап синтеза конъюгата перед иммунизацией.
Детектирование амфетаминов в моче с помощью иммунохроматографических тест-полосок. И.А. Шанин, О.Ю. Хан, А.Е. Петухов, А.В. Смирнов, С.А. Еремин.Каждый метод имеет свои недостатки и преимущества. Выбор способа зависит от цели исследования. Поскольку скрининг – анализы не имеют юридической силы.
Предварительное тестирование
Иммунохимические методы детектирования построены на принципе образующегося комплекса антиген—антитело. В исходный компонент системы введена метка. Именно она и отвечает за скорость исследования. Поэтому экспресс – тестирование наиболее распространено.
Преимущества:
- Экспрессность;
- Специфичность;
- Простота выполнения анализа;
- Высокая чувствительность;
- Скорость интерпретации результата;
- Отсутствие предварительной подготовки тестируемых образцов.
Иммунохроматографический анализ позволяет самостоятельно провести диагностику и интерпретировать результат согласно инструкции.
Специфичность экспресс – теста отличается (зависит от фирмы производителя). Аптечные варианты тестов детектируют маркеры наркотика на уровне пороговой концентрации 300 нг/мл. Таким образом, если концентрация метаболитов ниже установленных значений, то тест покажет ложноотрицательный результат.
Количественное определение метамфетамина в биологическом образце тоже можно провести при помощи тест-полосок. По интенсивности цвета тестовой линии определяют концентрацию вещества согласно шкале.
Тесты для проведения экспресс - диагностики:
- Креатив МП;
- Наркоскрин;
- ИХА – Метамфетамин – Фактор;
- ИммуноХром – Метамфетамин;
- ИммуноХром – 5 – Мульти – Экспресс.
Все положительные результаты скрининг - анализа подлежат дальнейшему инструментальному исследованию. Но даже если получен отрицательный результат и есть сомнения в достоверности исследования, то биологический образец также может быть направлен в химико – токсикологическую лабораторию.
Первый этап создания метода определения амфетамина и антител к ним в биологических жидкостях человека связан с получением биохимических реагентов. Именно их качественные характеристики относятся к главным факторам анализа, составляющих основу биотехнологической разработки. Реагентами при разработке твердофазного иммуноферментного анализа являются специфические антитела и антигены.
Разработка иммуноферментного метода анализа амфетамина и антител к нему в биологических жидкостях человека. Киселева Р. Ю.
наркомании
Интерпретация результатов экспресс – тестирования
Если в моче присутствуют маркеры метамфетамина, то происходит реакция и в контрольной зоне появляется полоса, окрашенная в розовый цвет – тест положительный. При индикации двух полос – тестовой и контрольной – тест считается отрицательным. Маркеры наркотика отсутствуют, либо концентрация ниже установленных значений.
Подтверждающие методы
В химико – токсикологической лаборатории проводят качественный и количественный анализ образцов. Сочетание различных методик позволяет провести развернутый анализ. Масс – спектромер помогает идентифицировать маркеры метамфетамина даже в неизвестном наркотическом веществе.
Исследование уступает иммунохимическим методам по скорости. Но превышает по чувствительности и специфичности. Лабораторная диагностика проводится в два этапа и требует проведения пробоподготовки образцов, что значительно увеличивает время исследования. Но инструментальные методы считаются наиболее эффективными. Возможность получения недостоверного результата сведена к минимуму.
Независимо от метода наркодиагностики обмануть исследование невозможно.
Отрицательный результат возможен только в нескольких случаях:
- Маркеры отсутствуют в биологическом образце;
- Концентрация метаболитов ниже пороговых значений;
- Образец заменен или намеренно испорчен.
При подозрении на фальсификацию биожидкость для тестирования собирается под контролем лаборанта или уполномоченного лица.
Для вычисления хроматографических индексов удерживания анализируемых веществ, параллельно хроматографированию подвергается хлороформный раствор смеси алканов нормального строения с числом атомов углерода от 9 до 35. Для подтверждения идентификации производных фенилэтиламина по масс-спектрам анализируемые вещества исследуются методом ЯМР спектроскопии.
Хроматографическая идентификация некоторых производных фенилэтиламина. С. В. Нехорошев, Е. С. Моисеева, С. П. Шарко, О. И. Моисеева.Возможно, ли получить недостоверные результаты
Ложноположительные и ложноотрицательные результаты встречаются при исследовании образцов хроматографическим методом. Низкая концентрация маркеров или перекрестная реакция приводит к получению недостоверных результатов.
Заключение
- Метамфетамин медленно метаболизируется в организме.
- Для экспресс - тестирования необходима моча или слюна.
- Химико – токсикологическое исследование позволяет исследовать любой биологический образец.
- Для лабораторного исследования необходимо минимальное количество биожидкости.
- Обмануть предварительное или подтверждающее тестирование невозможно.
